‘红霞’金线莲组培培养基配方优化技术研究

　　摘 要：以金线莲品种‘红霞’为试验材料，采用L9(33)正交法添加不同浓度的有机添加物香蕉、蔗糖，以筛选出对金线莲培苗培育壮苗最有利的培养基。结果表明：金线莲母苗剪成带1个茎节、长1～2cm的茎段，接种于培养基，培养130d即可获得健壮苗。不同含量的香蕉及蔗糖对于金线莲的株高、茎粗和生根数的影响有明显差异。在有机添加物香蕉成分不变的条件下，蔗糖含量提高，株高、茎粗和生根数也随之提高影响但不显著。当有机添加物蔗糖成分不变，香蕉成分不同对株高、茎粗和生根数有显著影响。说明有机添加物香蕉成分对金线莲组培有效苗率的影响大，有机添加物蔗糖成分对金线莲组培有效苗率的影响小。有机添加物的含量以香蕉300g/L+蔗糖20g/L培养金线莲壮苗的效果最佳。

　　关键词：金线莲;培养基;有机添加物;香蕉;蔗糖

　　金線莲[Anoectochilus roxburghii (wa11.) Lind1.]，又称花叶开唇兰、金线草、乌参、金线入骨消等，为兰科开唇属多年生珍稀草本药用植物。金线莲化学组成成分多样，全草均可入药，其主要含有糖类、牛磺酸、黄铜类、甾体化合物、强心甙类、生物碱等活性成分，主要功效为滋阴降火、消炎镇痛等。现代药理研究表明，金线莲主要用于治疗糖尿病、肝炎、肺炎、心脏病等疾病[1]。金线莲自然生长下对生长环境的要求较为苛刻，且种子没有发育完善，在自然状态下萌发十分困难，因此金线莲的有性繁殖较为困难;且由于其药用价值较高，采摘人数过多，繁殖困难与过度采挖导致金线莲的野生资源稀缺[2]。因此，目前市场上金线莲大多由人工繁殖和栽培。金线莲品种‘红霞’叶片椭圆，颜色较深，叶脉呈金色，茎干粗壮黑硬，是一种比较完美的金线莲。但目前针对‘红霞’的研究较少，没有投入批量生产，价格较高。因此本实验采用‘红霞’进行研究，试图探索‘红霞’的组培快繁技术。

　　金线莲的人工繁殖主要有人工种子、种子无菌培养、离体快繁等几种方式，对金线莲离体快繁的影响因素较多，如光照、温度、基本培养基、激素及有机添加物的成分及含量等。江建铭等研究认为以1/2MS为基本培养基，添加一定比例的NAA和6-BA，再加入20%的香蕉或者椰汁，对金线莲的壮苗生长十分有利[3]。王建明等发现在培养基中适当的添加有机物，如蛋白胨、香蕉汁能够有效的促进增殖及壮苗[4]。王丽芳研究发现，在培养基中添加香蕉和马铃薯对金线莲产量增加均有明显的促进作用[5]。但有机添加物香蕉、蔗糖对金线莲的壮苗培养影响，未见前人对其进行系统研究。本研究在前人研究的基础上，开展了金线莲组培苗有机添加物对金线莲壮苗培养影响的正交试验。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 金线莲‘红霞’组培母苗，由温州市农业科学研究院植物组织培养实验室提供。

　　1.2 试验方法

　　1.2.1 增殖与生根培养 当金线莲母苗长到6～8cm高时，剪成带1个茎节、长1～2cm的茎段，接种于自制的培养基中。自制培养基以1/2MS基本培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+AG1.25mg/L+AC0.5g/L+琼脂6g/L+蛋白胨1g/L作为基础培养体系，添加不同浓度的有机物添加物香蕉、蔗糖，香蕉、蔗糖各设3个用量(见表1)。采用L9(33)正交法研究2种有机添加物在不同浓度下对金线莲‘红霞’壮苗的影响。每处理接种9瓶，每瓶18个芽，重复3次，培养室温度(24±2)℃，接种后10d置于黑暗培养，10d后光照培养10h/d，光照强度为1750～2000lx，培养基pH值均为5.8。

　　1.2.2 指标测定 培养130d后对各组苗的生长情况进行记录，测定其株高(用直尺测定茎基部至最高芽顶端的长度)、茎粗(用游标卡尺测定茎基部直径)和生根数(每个处理所有植株根系总条数/植株总数)。株高5～7cm、根数>2条、无污染的植株为有效苗，有效苗率(%)=有效苗数/接种数×100。

　　1.3 数据分析 运用Excel 2010软件对数据进行整理，使用SPSS17.0进行数据的分析。

　　2 结果与分析

　　2.1 不同有机添加物对金线莲成苗培养的影响 金线莲成苗组培一般需要15d才能用肉眼观察出其变化。接种10d时，对其进行遮荫处理，之后去荫，刚长出的小芽一般为黄白色，随着生长时间的延长慢慢变成黄绿色(如图1)，刚萌发的小芽，没有十分明显的辨识度，可能是刚萌发的缘故。接种45d后茎节处萌发出1～2个芽，新叶伴随长出(见图2);培养90～95d，植株长成具有3～4个节的小苗，在基部第1和2节处分布许多白色毛状根并长出根系(见图3);随着茎节不断生长，根系也逐渐变长，部分根系扎入培养基中;培养130d可获得健壮苗(见图4)。

　　2.2 不同有机添加物对金线莲壮苗培养的影响 从表2可以看出，培养基有机添加物成分对金线莲组培有效苗率、株高、茎粗和生根数有较大影响，不同处理组培有效苗率有显著影响(P<0.05)。培养130d，处理8和5的有效苗率显著高于处理1，以处理8的有效苗率最高为93.2%，其次处理5的有效苗率为92.6%，处理1的有效苗率最低为82.7%。株高最高是处理9，培养130d后株高为6.61cm，其他依次为处理6、8、7、5、3、4、2和1;茎粗最大的是处理9，其茎粗为2.30mm，其他依次为处理8、6、7、5、4、3、2和1;由于增殖芽生长不一致，导致株高和茎粗存在一定的差异。生根数最多的是处理9，培养130d后生根2.7条，其他依次为处理8、6、7、5、4、3、2和1。

　　当有机添加物香蕉成分不变，蔗糖成分不同对金线莲组培有效苗率无显著影响，对株高、茎粗和生根数有影响，随着蔗糖含量提高，株高、茎粗和生根数随之提高的趋势。当有机添加物蔗糖成分不变，香蕉成分不同对处理(1、4、7)和处理(2、5、8)金线莲组培有效苗率显著影响(P<0.05)，对处理(3、6、9)金线莲组培有效苗率无显著影响;对株高、茎粗和生根数有影响。说明有机添加物香蕉成分对金线莲组培有效苗率的影响程度大，有机添加物蔗糖成分对金线莲组培有效苗率的影响程度小，影响程度大小为：香蕉>蔗糖，这可能与蔗糖含量提高，组培苗污染加重有关。有机添加物蔗糖和香蕉成分不同，对株高、茎粗和生根数有一定影响。

　　综合成本和瓶苗质量，金线莲壮苗培养以处理8效果最显著。

　　3 小结与讨论

　　金线莲母苗剪成带1个茎节、长1～2cm的茎段，接种于培养基，培养130d即可获得健壮苗，较常规的增殖、生根分段培养缩短时间25～30d，节约能耗20%，节约劳动力35%。在药用植物的离体快繁过程中，常常向培养基中添加附加物以提高产物产量，常用的添加物有香蕉泥、椰乳、蔗糖等，添加物中的氨基酸、糖、植物激素等物质[5]，研究表示这些添加物能够有效促进金线莲细胞的增殖分化。通过添加香蕉和蔗糖不同用量培养基配方试验，以有机添加物香蕉300g/L+蔗糖20g/L培养金线莲壮苗效果最佳，可能是因为蔗糖与香蕉为金线莲提供了高糖高盐的环境，使其拥有足够的营养进行生长代谢。其中添加物香蕉比蔗糖对金线莲组培有效苗率影响更大，这可能与蔗糖含量提高，组培苗污染加重有关。有机添加物蔗糖和香蕉成分不同，对株高、茎粗和生根数有一定影响。优化培养基配方为1/2MS基本培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+AG1.25mg/L+AC0.5g/L+琼脂6g/L+蛋白胨1g/L+香蕉300g/L+蔗糖20g/L。但有机添加物香蕉300g/L是否最佳用量，有待进一步配比研究。

　　参考文献

　　[1]福建中医药研究所编.福建药物志[M].第二册.福州：福建科技出版社，1982;215.

　　[2]许文江，陈裕，林坤瑞.药用野生金线莲植物资源的研究[J].福建热作科技，2000(4)：9-10.

　　[3]江建铭，俞旭平，沈晓霞，等.金线莲组培快繁技术研究[J].时珍国医国药，2009，20(02)：408-410.

　　[4]王建明，王松良，詹巧杰，等.金線莲组织培养的条件优化研究[J].中国现代中药，2013，15(01)：45-49.

　　[5]王丽芳.不同培养基及添加物对金线莲生长量的影响[J].北方园艺，2011(05)：175-176.